qPCR DNA এর পরিমাণ পরিমাপ করতে ব্যবহৃত একটি অত্যাধুনিক প্রযুক্তি PCR ব্যবহার করে একটি নমুনায় . qPCR পরিমাণগত পলিমারেজ চেইন বিক্রিয়া শব্দটি বোঝায় . যদিও এটি একটি উন্নত পদ্ধতি, আমরা বিশ্লেষণ করতে পারি qPCR এক্সেলে ডেটা। এই নিবন্ধে, আমরা আপনাকে দেখাব দুই কিভাবে qPCR বিশ্লেষণ করতে হয় তার পদ্ধতি এক্সেলে ডেটা। আপনি যদি তাদের জানতে আগ্রহী হন, তাহলে আমাদের অনুশীলন ওয়ার্কবুক ডাউনলোড করুন এবং আমাদের অনুসরণ করুন৷
আপনি এই নিবন্ধটি পড়ার সময় অনুশীলনের জন্য এই অনুশীলন ওয়ার্কবুকটি ডাউনলোড করুন৷
qPCR বিশ্লেষণ কি?
qPCR অথবা পরিমাণগত পলিমারেজ চেইন বিক্রিয়া DNA এর পরিমাণ পরিমাপ করতে ব্যবহৃত একটি অত্যাধুনিক প্রযুক্তি PCR (পলিমারেজ চেইন বিক্রিয়া) ব্যবহার করে একটি নমুনায় . qPCR ডেটা বিশ্লেষণ করার দুটি উপায় রয়েছে।
ডাবল ডেল্টা Ct পদ্ধতি
2001 সালে, লিভাক এবং Schmittgen এই বিশ্লেষণ পদ্ধতিকে বলা হয়, ডাবল ডেল্টা Ct পদ্ধতি এটি Pfaffl এর একটি নির্দিষ্ট ক্ষেত্রে পদ্ধতি এই পদ্ধতি অনুসারে, আমাদের দুই ইনপুট করতে হবে পরীক্ষামূলক ডেটার গড় সেট (জিন পরীক্ষিত পরীক্ষামূলক এবং হাউজকিপিং জিন এক্সপেরিমেন্টাল ) এবং নিয়ন্ত্রণ ডেটা (জিন পরীক্ষিত নিয়ন্ত্রণ এবং হাউজকিপিং জিন কন্ট্রোল ) এই মানগুলি ব্যবহার করে, আমরা ∆CTE এর মান পাব এবং ∆CTC , যথাক্রমে।
∆CTE এর মান জিন টেস্টেড এক্সপেরিমেন্টাল (TE)-এর ডিডাকশন মানের প্রতিনিধিত্ব করে এবং হাউসকিপিং জিন এক্সপেরিমেন্টাল (HE) . ∆CTE এর সাধারণ অভিব্যক্তি হল:
একইভাবে, ∆CTC এর মান হাউসকিপিং জিন কন্ট্রোল (HC) এর ডিডাকশন ভ্যালু বোঝায় জিন টেস্টড কন্ট্রোল (TC) থেকে . এই শব্দটির গাণিতিক অভিব্যক্তি হল:
এর পরে, আমাদের ∆∆Ct এর মান অনুমান করতে হবে . ∆∆Ct এর মান নির্ধারণের সূত্র হল:
অবশেষে, আমরা জিন এক্সপ্রেশন অনুপাত মূল্যায়ন করব . এই পদ্ধতি অনুসারে, আমরা প্রাইমার দক্ষতা ধরে নিই পরীক্ষামূলক এবং নিয়ন্ত্রণ উভয় জিনের জন্য 100% . এইভাবে, জিন এক্সপ্রেশন অনুপাত এর অভিব্যক্তি হল:
Pfaffl পদ্ধতি
Pfaffl পদ্ধতি হল qPCR-এর জন্য একটি সাধারণ পদ্ধতি বিশ্লেষণ এই পদ্ধতির সাথে ডাবল ডেল্টা Ct এর মিল রয়েছে পদ্ধতি যাইহোক, প্রাইমার দক্ষতা এই পদ্ধতিতে মান 100% নয় . এটি যেকোনো সংখ্যা হতে পারে। সাধারণত, এই মান 90% এর মধ্যে থাকে 110% থেকে উভয়ের জন্য হাউস কিপিং জিন (HKG) এবং জিন অফ ইন্টারেস্ট (GOI) . 2001 সালে, মাইকেল ফাফল নিউক্লিক অ্যাসিড গবেষণা-এ এই বিশ্লেষণ সূত্র দেওয়া হয়েছে জার্নাল।
এই পদ্ধতিতে, আমাদের দুটি সেট ডেটা ইনপুট করতে হবে। এই ডেটা ব্যবহার করে, আমরা তাদের গড় মান গণনা করি। তারপরে, আমরা নিয়ন্ত্রণ নমুনার গড় অনুমান করি। এটি থেকে, আমরা ∆Ct এর মান নির্ধারণ করব . ∆Ct এর অভিব্যক্তি হল:
তাছাড়া, জিন এক্সপ্রেশন অনুপাত বিশ্লেষণ করার জন্য গাণিতিক সূত্র হল:
এক্সেলে qPCR ডেটা বিশ্লেষণ করার 2 সহজ উপায়
এই প্রতিযোগিতায়, আমরা qPCR বিশ্লেষণ করতে যাচ্ছি তিন এর জন্য ডেটা অথবা পাঁচ তথ্যের নমুনা। আমরা প্রথমে ডাবল ডেল্টা Ct-এর বিশ্লেষণ পরিচালনা করব পদ্ধতি এবং তারপর আমরা Pfaffl পদ্ধতি প্রদর্শন করব .
1. ডাবল ডেল্টা Ct পদ্ধতির মাধ্যমে qPCR ডেটা বিশ্লেষণ করুন
qPCR বিশ্লেষণের জন্য ডাবল ডেল্টা Ct এর মাধ্যমে ডেটা পদ্ধতি, আমরা পাঁচ এর একটি ডেটাসেট বিবেচনা করি DNA নমুনা এই পদ্ধতিতে, আমাদের PCR প্রাইমার দক্ষতা এর মান বিবেচনা করতে হবে পরীক্ষামূলক জিন এবং নিয়ন্ত্রণ জিন উভয়ের জন্যই 100% . আমরা এটাও দাবি করতে পারি যে এটি Pfaffl পদ্ধতির একটি নির্দিষ্ট ক্ষেত্রে নিম্নলিখিত ধাপগুলি বিশ্লেষণ করা হবে:
📌 ধাপ:
- প্রথমত, চিত্রে দেখানো হিসাবে সঠিকভাবে সমস্ত জিনের মান ইনপুট করুন। আমাদের জিন টেস্টেড এক্সপেরিমেন্টাল(TE)-এর সমস্ত পরীক্ষামূলক মান ইনপুট করতে হবে এবং হাউসকিপিং জিন এক্সপেরিমেন্টাল(HE) B কলামে এবং C একইভাবে, জিন টেস্টড কন্ট্রোল(TC)-এর সমস্ত নিয়ন্ত্রণ মান ইনপুট করুন এবং হাউজকিপিং জিন কন্ট্রোল(HC) D কলামে এবং E যথাক্রমে।
- এখন, কক্ষে F5 , ∆CTE এর মান গণনা করতে , নিচের সূত্রটি লিখুন।
=B6-C6
- এন্টার টিপুন .
- একইভাবে, ∆CTC এর মান অনুমান করতে , নিচের সূত্রটি সেল G5 এ লিখুন .
=D6-E6
- আবার, এন্টার টিপুন .
- তারপর, সেল H5 নির্বাচন করুন এবং ∆∆Ct এর মান পেতে নিম্নলিখিত সূত্রটি লিখুন .
=F6-G6
- এন্টার টিপুন .
- অবশেষে, জিন এক্সপ্রেশন অনুপাত এর মান গণনা করতে অথবা 2^(−∆∆Ct) , I5 ঘরে নিচের সূত্রটি লিখুন .
=2^(-H6)
- এন্টার টিপুন শেষবারের মতো।
- এর পর, সেলের পরিসর নির্বাচন করুন F6:I6 .
- ডাবল-ক্লিক করুন ফিল হ্যান্ডেল-এ সারি 10 পর্যন্ত সূত্র অনুলিপি করতে আইকন .
- আপনি জিন এক্সপ্রেশন রেশিও এর মান পাবেন প্রতিটি নমুনার জন্য।
সুতরাং, আমরা বলতে পারি যে আমাদের পদ্ধতিটি পুরোপুরি কাজ করেছে, এবং আমরা qPCR বিশ্লেষণ করতে সক্ষম এক্সেলে ডেটা।
🔍 ফলাফলের ব্যাখ্যা
জিন এক্সপ্রেশন রেশিও এর মান এর 0.6507 ঘরে I5 মানে পরীক্ষিত অবস্থায় জিনের নমুনা নিয়ন্ত্রণ অবস্থার সাপেক্ষে আমাদের হাউসকিপিং জিনে সব স্বাভাবিক করা হয়েছে। তদুপরি, আপনি শতাংশের মেয়াদে এটি বিবেচনা করতে পারেন। 0.6507 মানে 65.07% আমাদের পরীক্ষিত অবস্থায় জিনের অভিব্যক্তি আমাদের নিয়ন্ত্রণ অবস্থা সহ .
আরো পড়ুন:কিভাবে এক্সেলে বড় ডেটা সেট বিশ্লেষণ করবেন (6 কার্যকরী পদ্ধতি)
একই রকম পড়া
- এক্সেলে বিক্রয় ডেটা কীভাবে বিশ্লেষণ করবেন (10টি সহজ উপায়)
- [স্থির:] ডেটা বিশ্লেষণ এক্সেলে দেখানো হচ্ছে না (2 কার্যকরী সমাধান)
- এক্সেলে লাইকার্ট স্কেল ডেটা কীভাবে বিশ্লেষণ করবেন (দ্রুত পদক্ষেপ সহ)
- এক্সেলের একটি প্রশ্নাবলী থেকে গুণগত ডেটা বিশ্লেষণ করুন
2. Pfaffl পদ্ধতি
ব্যবহার করে qPCR বিশ্লেষণ করুনএই পদ্ধতিতে, আমরা Pfaffl পদ্ধতি ব্যবহার করব . ডাবল ডেল্টা Ct-এর সাথে এই পদ্ধতির মধ্যে প্রধান পার্থক্য পদ্ধতিটি PCR প্রাইমার কার্যকারিতা এর মান পরীক্ষামূলক জিন এবং নিয়ন্ত্রণ জিন উভয়ের জন্য যা 100% নয় . এই উদাহরণে, আমরা প্রাইমার দক্ষতা ধরে নেব উভয় ক্ষেত্রেই মান। হাউস কিপিং জিনের জন্য নমুনা, আমরা প্রাইমার দক্ষতা এর মান অনুমান করছি হল 93% , যেখানে আগ্রহের জিনের জন্য এই মান হবে101%। এই পদ্ধতির ধাপগুলি নীচে দেওয়া হল:
📌 ধাপ:
- প্রথমে, সমস্ত জিনের মান সঠিকভাবে ইনপুট করুন, যেমন ছবিতে দেখানো হয়েছে। আমাদের চিকিত্সা করা এর সমস্ত দুটি সেট ইনপুট করতে হবে এবং নিয়ন্ত্রণ হাউস কিপিং জিন (HKG) এর জিনের মান এবং জিন অফ ইন্টারেস্ট (GOI) . উভয় জিন সেটকে Ct-1 নির্দেশ করা হয় এবং Ct-2 যথাক্রমে।
- প্রথমে, আমরা হাউস কিপিং জিন (HKG) এর জন্য সমস্ত গণনা সম্পূর্ণ করব বিভাগ।
- এখন, আমরা উভয় সেটের গড় মান নেব। এর জন্য, আমরা AVERAGE ফাংশন ব্যবহার করতে যাচ্ছি ।
- সেলে E6 নিচের সূত্রটি লিখুন .
=AVERAGE(C6:D6)
- এন্টার টিপুন .
- তারপর, ডাবল-ক্লিক করুন ফিল হ্যান্ডেল-এ E11 কক্ষ পর্যন্ত সূত্র অনুলিপি করতে আইকন .
- তার পর, আমাদের তিন-এর গড় অনুমান করতে হবে নিয়ন্ত্রণ মান।
- তার জন্য, মার্জ করা F6-এ নিম্নলিখিত সূত্রটি লিখুন
=AVERAGE(E9:E11)
- এন্টার টিপুন .
- এখন, সেল G6 নির্বাচন করুন এবং ∆Ct এর মান পেতে নিম্নলিখিত সূত্রটি লিখুন . নিশ্চিত করুন যে আপনি এবসোলিউট সেল রেফারেন্স ইনপুট করেছেন৷ সেল F6-এর জন্য .
=E6-$F$6
- আবার, এন্টার টিপুন .
- তারপর, ডাবল-ক্লিক করুন ফিল হ্যান্ডেল-এ G11 সেল পর্যন্ত সূত্রটি অনুলিপি করার জন্য আইকন .
- হাউস কিপিং জিন (HKG) এর জন্য আমাদের সমস্ত হিসাব শেষ।
- একইভাবে, একই প্রক্রিয়া অনুসরণ করে জিন অফ ইন্টারেস্ট (GOI)-এর জন্য সমস্ত গণনা সম্পূর্ণ করুন বিভাগ।
- অবশেষে, কক্ষে O6 , রাশি অনুপাতের মান পেতে নিম্নলিখিত সূত্রটি লিখুন। পরম সেল রেফারেন্স নিশ্চিত করুন কক্ষের জন্য N6 এবং H6 .
=($N$6^M6)/($H$6^G6)
- এন্টার টিপুন শেষবারের মতো।
- এখন, ডাবল-ক্লিক করুন ফিল হ্যান্ডেল-এ O11 কক্ষ পর্যন্ত সূত্র অনুলিপি করতে আইকন .
- আপনি প্রতিটি নমুনার জন্য এক্সপ্রেশন অনুপাতের মান পাবেন।
সুতরাং, আমরা বলতে পারি যে আমাদের পদ্ধতি সফলভাবে কাজ করেছে, এবং আমরা qPCR বিশ্লেষণ করতে সক্ষম এক্সেলে ডেটা।
উপসংহার
এটি এই নিবন্ধের শেষ। আমি আশা করি এই নিবন্ধটি আপনার জন্য সহায়ক হবে এবং আপনি qPCR বিশ্লেষণ করতে সক্ষম হবেন এক্সেলে ডেটা। আপনার যদি আরও কোনো প্রশ্ন বা সুপারিশ থাকে তাহলে অনুগ্রহ করে নিচের মন্তব্য বিভাগে আমাদের সাথে আরও কোনো প্রশ্ন বা সুপারিশ শেয়ার করুন।
আমাদের ওয়েবসাইট ExcelDemy চেক করতে ভুলবেন না অনেক এক্সেল-সম্পর্কিত সমস্যা এবং সমাধানের জন্য। নতুন পদ্ধতি শিখতে থাকুন এবং বাড়তে থাকুন!
সম্পর্কিত প্রবন্ধ
- কিভাবে পিভট টেবিল ব্যবহার করে এক্সেলে ডেটা বিশ্লেষণ করবেন (9টি উপযুক্ত উদাহরণ)
- এক্সেলে টাইম-স্কেল করা ডেটা বিশ্লেষণ করুন (সহজ পদক্ষেপ সহ)
- এক্সেলে গুণগত ডেটা কীভাবে বিশ্লেষণ করবেন (সহজ পদক্ষেপ সহ)
- এক্সেল ডেটা বিশ্লেষণ ব্যবহার করে কেস স্টাডি সম্পাদন করুন
- এক্সেলে টেক্সট ডেটা কীভাবে বিশ্লেষণ করবেন (5টি উপযুক্ত উপায়)
