পাইথন ৩.০ ডিসেম্বর ২০০৮-এ রিলিজ হয়েছিল। এটি পূর্ববর্তী ভার্সনের কিছু ত্রুটি সংশোধনের জন্য ডিজাইন করা হয়েছিল। পাইথন ৩-এর গাইডিং প্রিন্সিপল: "পুরানো পদ্ধতিগুলো সরিয়ে ফিচার ডুপ্লিকেশন কমাতে"। পাইথন ৩.০ ব্যাকওয়ার্ড কম্প্যাটিবিলিটি প্রদান করে না। অর্থাৎ, ২.x সিনট্যাক্সে লেখা প্রোগ্রাম ৩.x ইন্টারপ্রেটারে চলবে না। ভার্সন ২.৭ পাইথন ২.x সিরিজের চূড়ান্ত মেজর রিলিজ।
যদিও এই দুটি ভার্সনের ব্যবহারে অনেক পার্থক্য আছে, সবচেয়ে স্পষ্ট موارد নিচে দেওয়া হলো:
print পাইথন ২.৭-এ একটি কীওয়ার্ড, কিন্তু পাইথন ৩.x-এ বিল্ট-ইন ফাংশন হিসেবে অন্তর্ভুক্ত। ফলস্বরূপ পাইথন ৩-এ parentheses বাধ্যতামূলক।
print "Hello World" # পাইথন ২-এ قابل, পাইথন ৩-এ নয়
print("Hello World") # পাইথন ২ এবং ৩ দুটোতেই قابل
raw_input() — পাইথন ২.৭-এর ফাংশন, এটি ডিপ্রিকেট করা হয়েছে। input() ফাংশন রিসিভ করা ডেটাকে শুধু স্ট্রিং হিসেবে বিবেচনা করে।
ইন্টিজার ডিভিশন — ফাংশনালিটি পাইথন ৩-এ পরিবর্তন হয়েছে। পাইথন ২.x-এ 5/2 ফলাফল ২, কিন্তু পাইথন ৩.x-এ 5/2 হল ২.৫।
UNICODE — পাইথন ৩.x-এ স্ট্রিং ডিফল্টে ইউনিকোড। পাইথন ২.x-এ স্ট্রিংকে স্পষ্টভাবে 'u' প্রিফিক্স দিয়ে ইউনিকোড ডিক্লেয়ার করতে হতো (যেমন u'hello')।
Long integer — পাইথন ৩.x-এ ইন্টিজার অবজেক্ট ডিফল্টে long। পাইথন ২.x-এ ইন্টিজারকে 'L' পোস্টফিক্স দিতে হতো (যেমন 100L)।